PEPC和NAD-MDH基因是果实发育过程中苹果酸代谢的关键基因，与苹果酸的合成相关。
作者通过动力学拟合分析，当达到抑制浓度400mmol/L时，产物与底物非竞争性地结合KpADH形成三元复合物，使KpADH构象改变，不能进一步释放产物，导致酶活力下降。但在加入底物反应1h左右,反应快速终止在400mmol/L的转化水平，说明反应过程中较高的底物或产物浓度抑制了KpADH合成产物(S)-NBHP。
当底物浓度为250mmol/L时，反应可实现完全转化，然而在底物浓度分别为500mmol/L和1mol/L时，底物的转化水平分别为390mmol/L和460mmol/L。例如生物催化剂载量，其决定反应过程中酶制剂的经济效应。这说明产物与酶的非活性部位相结合，形成产物和酶的络合物后会进一步再与底物结合：或者是酶与底物结合形成底物和酶络合物后，部分再与产物结合。考虑到适用于大规模的酶法制备，一些商业参数指标需要参考。较高的比活力有利于生物催化剂在较低的载量下实现底物浓度载量上的生物转化数,从而实现经济高效的生物催化过程。
因此，在不同的底物浓度下硒ADH的转化水平停留在400mmol/L。其中Cg26的立体选择性为尺构型，其余3种为S构型。RE-52A旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂。
有机溶剂提取法可以有效减少一些水溶性杂质的溶出，便于后续的分离和纯化。迷迭香酸提取纯化方法主要有水提法、有机溶剂提取法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、膜分离技术、大孔树脂吸附法、结晶法等。1.3 迷迭香酸粗品制备取迷迭香干叶按1∶10加含75%乙醇水溶液（pH=2），加入到20L萃取罐中，85℃回流提取1.0h，放出萃取液，再加入8倍75%乙醇水溶液（pH=2），回流提取1.0h离心后，合并提取液，过四层纱布，闪蒸仪浓缩蒸馏出酒精，卷式膜过滤，喷雾干燥得含量约为5%粗品。分别用1.0倍体积的乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷进行萃取，共萃取两次，采用高效液相色谱仪检测上下相中迷迭香酸的含量，确定最佳的两相分配工艺。
500色度标准使用液配制：称取0.0437g重铬酸钾和1.0g硫酸钴，加水溶解后继续加入0.5mL硫酸，配成500mL的溶液。1.6.5 正交试验设计设计L9（34）的三因素三水平正交实验考察萃取剂种类、萃取水相的pH和萃取剂用量（为水相的倍数）对脱色率及含量的影响。
BSA224S-CW电子天平：赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。1.6 溶剂萃取工艺优化实验设计1.6.1 正丁醇萃取水相和含醇水相迷迭香酸的分配情况分别用15%乙醇和纯水溶解含量为90%的迷迭香酸样品配制成0.2mg/mL样液，加入等体积的正丁醇进行萃取，各重复3份，测定上下相中迷迭香酸的含量。本文以5%含量的迷迭香酸粗品为原料，优选萃取剂种类、萃取时间、次数、时间等因素，使产品中迷迭香酸含量大于35%（GB1886.1722016《食品添加剂迷迭香提取物》要求大于5%），并且实现脱色，为实施迷迭香酸的工业化生产及应用提供参考。1.7 数据处理采用SPSS16软件进行数据分析。
1.4.3 色度标准曲线的绘制及脱色率的计算（1）色度标准曲线的绘制标准色度单位：1L水中溶解有1mg铂和0.5mg钴，称该溶液所具有的色度为1度。超声波和微波辅助提取法具有提取效率高、提取时间短的优点，但均为辅助提取方法，且需超声或微波设备。将待测迷迭香酸粗品配制为2mg/mL的水溶液（pH=2），测定色度和迷迭香酸含量。迷迭香酸易溶于甲醇、乙醇水溶液、水，而难溶于氯仿、石油醚等有机溶剂。
（2）计算脱色率：将提取液稀释一定的倍数，在最大波长处测吸光值，将吸光值代入色度线性回归方程，求得产品色度。YC-1800喷雾干燥机：上海雅程仪器设备有限公司。
水提法既提取出水溶性有效成分，同时也提出一些水溶性杂质，如水提法分离的迷迭香酸粗品中含有较多的焦糖色素、蛋白和多糖类杂质，为后续纯化增加了困难。1.6.2 正丁醇萃取不同pH水相迷迭香酸的分配情况分别以不同pH的水相溶解含量为90%的迷迭香酸样品，用等体积正丁醇萃取，分相后，高效液相色谱法检测上下相中迷迭香酸的含量及分配情况。
以蒸馏水为对照液，在340nm～360nm的波长范围内测定500色度标准使用液的吸光度，选出最大吸收波长。声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。20升多功能提取系统：河南宁烁仪器设备有限公司。迷迭香干叶由河南尚佳农业科技有限公司提供。迷迭香酸标准品（含量：98%），购自西安利时生物科技有限公司。1.6.3 萃取剂的选择按料液比1∶8加入酸水溶解迷迭香粗提物，离心去除不溶物，分别用乙醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、三氯甲烷、正丁醇、石油醚、正己烷萃取按照1∶1的体积比进行萃取，共萃取两次，检测两次萃取后上相和最后的下相迷迭香酸的含量。
在最大波长处测吸光值。1.2 仪器与设备1260高效液相色谱仪：安捷伦科技有限公司。
迷迭香酸在不同植物中的含量各异，其应用价值也各不相同。1.4.2 高效液相色谱法测定迷迭香酸含量色谱条件：二极管阵列检测器（DAD），流动相为甲醇∶水=60∶40，流速为1mL/min，进样量为10L。
目前采用乙醇提取得到的迷迭香酸粗品含量基本在3～6%。752N紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司。
迷迭香中含有多种化学物质，主要成分为黄酮类、萜类、有机酸类和其他类，萜类是含量最多的一类，目前已经分离鉴定的化合物有迷迭香酸、鼠尾草酚、鼠尾草酸、齐墩果酸和熊果酸。1.6.4 四种萃取剂的对比实验选用含量为5%的迷迭香酸粗品，用pH2～3的酸水溶解配制为1mg/mL样液，分别用等体积的正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯和乙酸甲酯萃取后，测定所得产品的色度及迷迭香酸的含量，确定最佳的萃取剂。1 材料与方法1.1 材料与试剂实验所用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷、重铬酸钾、硫酸钴、盐酸等分析纯试剂均采购国药集团化学试剂有限公司。1.4 迷迭香酸含量及色度测定1.4.1 标准品及样品配制用甲醇溶解标准品配置成0.2mg/mL迷迭香酸标准溶液。
如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：迷迭香酸，硫酸钴，乙酸甲酯，石油醚。以溶液色度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制色度标准曲线。
迷迭香现在全世界各国广泛栽培。分别用移液枪移取1mL、2mL、3mL、4mL500色度标准使用液到四个5mL容量瓶中，加蒸馏水定容（稀释后，色度分别是100、200、300、400）。
GL-20G-C高速冷冻离心机：上海安亭科学仪器厂。脱色率按下式计算：1.5 萃取溶剂的选择称取9份10g原料，用60mL酸水溶解，离心去除不溶物。
耐高温能力强，可耐受长期240℃高温油炸而保持高抗氧化能力，可代替热不稳定的超氧化物歧化酶SOD作为自由基清除剂。RNF-0460卷式膜多功能小试设备：厦门世达膜科技有限公司如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系相关链接：香兰素，乙基香兰素，米粉，已酸乙酯。从表中可知，三组份试样的重复性测定结果香兰素RSD为0.16%、0.24%、0.18%，乙基香兰素RSD为1.02%、0.93%、0.64%，可见该方法重复性良好。
由表中可知，方法加标平均回收率香兰素和乙基香兰素分别为92.64～98.62和92.56～99.36，RSD分别为2.21%和2.48%，完全满足国家标准GB/T274172017《合格评定化学分析方法确认和验证指南》的要求。2.4 回收率与精密度准确称取混合均匀的阳性样品6份，每份2g，每份加入0.2mL香兰素标准溶液储备液和0.1mL乙基香兰素标准溶液储备液，做加标回收率试验，每组进行6次平行进样测定，计算样品加标回收率RSD值，见表2。
声明：本文所用图片、文字来源《中国食品添加剂》，版权归原作者所有。3 结论采用内标法标准曲线法对米粉中香兰素、乙基香兰素同时进行测定，20min内可以完成一次进样分析，具有简单易行、仪器分析时间短、准确度高、稳定性好、精密度高等优点，通过对样品的加标回收和样品中目标物质的反复多次验证，测试结果表明，完全满足国家标准NY/T15122014《绿色食品生面食、米粉制品》、GB107692010《食品安全国家标准婴幼儿谷类辅助食品》和广西状族自治区卫生院和计划生育委员会于2018年6月10日1制订实施的地方标准DBS45/051.12018《食品安全地方标准干制米粉》等标准规定的要求，本文为相关检测机构提供一定的应用价值和技术支持，为进一步对香兰素和乙基香兰素在食品中的检测提供一定的技术依据，为制订相应的检测标准提供一些理论参考。
2.5 重复性准确称取3份做加标回收率的样品2g，每份样品平行进样3次，计算出香兰素和乙基香兰素的含量及其RSD值，得到重复性结果，见表3。2.2 色谱图与方法线性将准确配制好的香兰素、乙基香兰素5个系列混合标准内标液和样品试样，在1.2.1条件下测定香兰素、乙基香兰素和内标已酸乙酯色峰谱面积，得到浓度为25g/mL香兰素、乙基香兰素标准溶液色谱图（图1）和样品色谱图（图2），以香兰素、乙基香兰素系列标准工作液的浓度为横坐标，以香兰素、乙基香兰素和已酸乙酯色谱峰面积的比值为纵坐标，绘制香兰素、乙基香兰素线性回归标准曲线如图3。
